细胞培养及传代方法

在进行细胞培养时，确保适宜的培养条件至关重要。对于大多数细胞系，例如A549细胞，其理想条件为：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：F12K + 10% FBS + 1% P/S

A549细胞是通过将肺癌组织移植至DJGriad培养形成的，患者为58岁白人男性。该细胞具备通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂的能力。

细胞传代步骤

细胞传代是一项核心操作。当细胞密度达到80%时，可以进行传代。具体步骤如下：

1. 细胞洗涤与消化

首先，将培养基弃去，使用不含钙、镁离子的PBS缓冲液对细胞进行1-2次洗涤。然后，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱内消化1-2分钟。观察细胞状态，若大多数细胞变圆且脱落，则迅速将培养瓶取回，轻拍瓶底后加入5ml以上的培养基以终止消化。

2. 细胞离心与重悬

轻吹细胞使其完全脱落后，将细胞悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液后添加1-2ml的完全培养基进行重悬。

3. 分瓶传代

最后，将细胞悬液按1:2比例分配至新的T25培养瓶中，添加5-8ml的完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱进行培养。

细胞冻存和复苏

为保存细胞，您可以进行冻存。步骤如下：

1. 准备冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，清洗后加入0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞脱落后进行离心。

2. 添加冻存液

弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。将冻存管直接放入-80℃冰箱以保存。

3. 细胞复苏

解冻时，将冻存管置于37℃的水浴中，待完全解冻后，将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行离心后，用新鲜培养基重悬细胞，并接种至培养瓶中。

注意：在运输过程中可能会出现细胞脱落现象，这是正常的。若脱落细胞较多，可收集培养液进行后续培养，以保证细胞活性。

通过以上步骤，您可以有效进行细胞的培养与传代，促进科研和临床研究的进展，选择尊龙凯时产品帮助您优化细胞培养过程。